細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（BET）是利用鱟試劑來檢測(cè)供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法，擁有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、專屬性強(qiáng)、試驗(yàn)結(jié)果易判斷等優(yōu)點(diǎn)， 因而被廣泛應(yīng)用于藥品、醫(yī)療器械、臨床醫(yī)學(xué)研究，各種水源、食品、動(dòng)物飼料等方面的體外內(nèi)毒素檢查。BET的反應(yīng)機(jī)理是一系列的酶促反應(yīng)，任何影響反應(yīng)機(jī)制因素的干擾，都會(huì)導(dǎo)致檢查結(jié)果的異常。特別是近些年生物醫(yī)藥的樣本組分越發(fā)復(fù)雜，對(duì)去除內(nèi)毒素檢測(cè)干擾提出更大的挑戰(zhàn)。
廈門鱟生科·BIOENDO給大家整理了以下檢測(cè)樣本時(shí)可能產(chǎn)生干擾的因素都有哪些：
環(huán)境內(nèi)毒素?zé)o處不在，操作環(huán)境及操作不當(dāng)可使在操作過程中帶來污染，所用器具處理不當(dāng)，被外來的內(nèi)毒素污染，都很容易導(dǎo)致假陽性結(jié)果。因此BET應(yīng)在符合規(guī)定的凈化間或操作臺(tái)進(jìn)行，盡量防止外源性內(nèi)毒素的污染。所用器材應(yīng)清洗干凈，用酸、堿洗液或洗滌劑清洗后, 應(yīng)反復(fù)沖洗干凈，避免殘留的內(nèi)毒素。如玻璃容器須在250℃干熱滅活至少30min。采樣用注射器及吸管應(yīng)有良好的精密度，玻璃容器材質(zhì)應(yīng)選用耐酸、堿的硬質(zhì)玻璃，膠管、膠塞應(yīng)使用優(yōu)質(zhì)醫(yī)用產(chǎn)品。實(shí)驗(yàn)所接觸的器皿耗材均要無內(nèi)毒素，以避免外源引入污染。操作人員在試驗(yàn)過程中勿大聲講話和急速行動(dòng)，防止塵埃和唾液濺入檢品中。
供試品的種類不同，對(duì)于BET的干擾因素不同，下面列舉了幾種常見的干擾因素及其解決方式。
二價(jià)陽離子：二價(jià)陽離子濃度不足(如Mg2+離子)，內(nèi)毒素?zé)o法激活鱟試劑中的酶，反應(yīng)被抑制。可通過使用鈣鎂離子添加劑（BY01）解決，注意過高的二價(jià)陽離子（如Ca2+）濃度可能會(huì)對(duì)試驗(yàn)帶來抑制作用。
高滲透壓：較高濃度的糖或鹽通常會(huì)抑制BET，可使用BET水在允許范圍內(nèi)進(jìn)行稀釋消除干擾。
酶、酶抑制劑：供試品若含有絲氨酸蛋白酶會(huì)增強(qiáng)反應(yīng)，若含有絲氨酸蛋白酶抑制劑會(huì)抑制反應(yīng)。通常的消除干擾的方式為：使用BET水或廠家提供的樣本處理液（ST09）稀釋10倍，然后75℃加熱10分鐘，冷卻至室溫后再檢測(cè)。
非內(nèi)毒素反應(yīng)物：β-葡聚糖會(huì)造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果假陽性，可使用G因子抑制劑（BT02）消除干擾。或使用內(nèi)毒素檢測(cè)試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。
洗滌劑：高濃度的洗滌劑會(huì)使鱟試劑的蛋白失活，可對(duì)供試品進(jìn)行稀釋降低干擾。
油脂類：脂類包裹內(nèi)毒素，使內(nèi)毒素?zé)o法暴露出來，實(shí)驗(yàn)結(jié)果將出現(xiàn)假陰性，可通過添加分散劑（PBS50）的方式去除干擾。
一般供試品溶液和鱟試劑混合后溶液的pH值在6.0~8.0的范圍內(nèi)為宜，pH值過高或過低，均可抑制鱟試劑與內(nèi)毒素的反應(yīng)， 使鱟試劑靈敏度下降?？梢酝ㄟ^酸堿緩沖液（BH02）調(diào)節(jié)供試品的pH值，使其處于最佳的pH范圍。
《中國(guó)藥典》規(guī)定鱟試驗(yàn)反應(yīng)溫度在37±1℃，凝膠法試驗(yàn)需要注意溫育時(shí)間60±2min。溫度過低，凝膠化推遲，溫度過高則破壞鱟試劑，阻止凝膠反應(yīng)；延長(zhǎng)溫育時(shí)間， 則提高了鱟試劑的靈敏度，易出現(xiàn)假陽性。光度法、重組C因子熒光法、重組級(jí)聯(lián)試劑顯色法(RCR0428)需要注意檢測(cè)設(shè)備（鱟試驗(yàn)微生物快速檢測(cè)系統(tǒng)ELx808IU-SN）溫控性能。
凝膠法試驗(yàn)在溫育過程和取放安瓿時(shí)要小心避免振動(dòng)造成假陰性。
BET結(jié)果會(huì)受多種因素的干擾，造成結(jié)果異常。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)按藥典規(guī)定的操作規(guī)程、實(shí)驗(yàn)條件、廠家專業(yè)培訓(xùn)指導(dǎo)，排除各種干擾因素，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
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