光度測定試驗(yàn)應(yīng)在特定的儀器中進(jìn)行，溫度一般為37℃±1℃。

為保證濁度和顯色試驗(yàn)的有效性，應(yīng)預(yù)先進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)以及供試品溶液的干擾試驗(yàn)。當(dāng)試驗(yàn)環(huán)境中發(fā)生了任何可能影響檢測結(jié)果的改變時(shí)，試驗(yàn)的有效性應(yīng)重新檢測。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素配成溶液并制成至少3個(gè)濃度的稀釋液（稀釋度不得大于10），最低濃度不得低于所用鱟試劑的標(biāo)示檢測限。每一稀釋步驟的混勻時(shí)間同凝膠法，每一濃度至少做3支平行管。同時(shí)要求做2支陰性對(duì)照。當(dāng)陰性對(duì)照在設(shè)定的時(shí)間內(nèi)不發(fā)生反應(yīng)，將全部數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸分析。

根據(jù)線性回歸分析，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)（r）的絕對(duì)值應(yīng)該大于或等于0.980，試驗(yàn)方有效。否則須重新試驗(yàn)。

干擾試驗(yàn)

選擇標(biāo)準(zhǔn)線中點(diǎn)或一個(gè)靠近中點(diǎn)的內(nèi)毒素濃度。按表4制備溶液A、B、C和D。供試品和鱟試劑的加樣量、供試品和鱟試劑的比例以及保溫時(shí)間等，參照所用儀器和試劑的有關(guān)說明進(jìn)行。每種溶液至少做2個(gè)平行管。

表4 光度測定法干擾試驗(yàn)的制備

注 A：稀釋倍數(shù)未超過MVD的供試品溶液。

B：加入標(biāo)準(zhǔn)曲線中點(diǎn)或靠近中點(diǎn)的一個(gè)已知內(nèi)毒素濃度的，且與溶液A有相同稀釋倍數(shù)的供試品溶液。

C：如“標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)”項(xiàng)下描述的，用于制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素溶液。

D：陰性對(duì)照。

按所得線性回歸方程分別計(jì)算供試品溶液和含標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素的供試品溶液的內(nèi)毒素含量Ct和Cs，再按下式計(jì)算該試驗(yàn)條件下的回收率（R）。

R=(CS-Ct)/λm×100%

當(dāng)內(nèi)毒素的回收率在50%~200%之間，則認(rèn)為在此該試驗(yàn)條件下供試品溶液不存在干擾作用。

當(dāng)內(nèi)毒素的回收率不在指定的范圍時(shí)，須按“凝膠法干擾試驗(yàn)”中的方法去除干擾因素。并要重復(fù)干擾試驗(yàn)來驗(yàn)證處理的有效性。

檢查法

按“光度法的干擾試驗(yàn)”中的操作步驟進(jìn)行檢測。

使用溶液C生成的標(biāo)準(zhǔn)曲線來計(jì)算溶液A的每一平行管的內(nèi)毒素濃度。

試驗(yàn)必須符合以下三個(gè)條件方為有效：

（1）系列溶液C的結(jié)果要符合“光度技術(shù)預(yù)試驗(yàn)”下“標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)”中的要求。

（2）用溶液B中的內(nèi)毒素濃度減去溶液A中的內(nèi)毒素濃度后，計(jì)算出的內(nèi)毒素的回收率要在50%-200%的范圍內(nèi)。

（3）溶液D（陰性對(duì)照）在規(guī)定的反應(yīng)時(shí)間內(nèi)未檢測出內(nèi)毒素。

若供試品溶液所在平行管的平均內(nèi)毒素濃度乘以稀釋倍數(shù)和濃度后，小于規(guī)定的內(nèi)毒素限值，判供試品符合規(guī)定。若大于規(guī)定的內(nèi)毒素限值，判供試品不符合規(guī)定。

（注：本檢查法中，“管”的意思包括其他任何反應(yīng)容器，如微孔板中的孔。）